hTERT启动子调控的异种抗原基因α-1,3GT表达载体的构建及其在肺癌细胞中的靶向表达

摘要

目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3galactosyltransferase,α-1,3GT)基因真核表达载体,研究其调控的α-1,3GT在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:将前期克隆并测序正确的猪α-1,3GT基因定向克隆到pEGFP-hTERTp质粒中,构建α-1,3GT真核表达载体pEGFP-hTERTp-GT。分别将pEGFP-hTERTp-GT和CMV启动子调控的α-1,3GT真核表达质粒pEGFP-N1-GT转染端粒酶阳性的人肺癌细胞A549及端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5。RT-PCR检测转染细胞中α-1,3GTmRNA的表达,免疫荧光法和流式细胞仪检测α-gal抗原的表达。结果:成功构建了pEGFP-hTERTp-GT真核表达载体。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均有α-1,3GTmRNA的表达;转染pEGFP-hTERTp-GT的A549中有α-1,3GTmRNA的表达,而端粒酶阴性的MRC-5细胞中无α-1,3GTmRNA的表达。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均可表达异种移植抗原α-gal;转染pEGFP-hTER-Tp-GT质粒的A549中有α-gal的表达,而MRC-5细胞中无α-gal的表达(P<0.01)。结论:hTERT启动子调控的α-1,3GT基因能靶向性表达在端粒酶阳性的肺癌细胞中,并合成异种移植抗原α-gal。