稻瘟菌诱导性稻叶脂氧合酶的进一步纯化及抗体制备

摘要

采用ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换、Ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ疏水层析、ＣＭ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ１００凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ等步骤，从非亲和性稻瘟菌侵染稻叶中纯化了两种诱导性脂氧合酶，即ＣＭ－Ｌｏｘｌ和ＣＭ－Ｌｏｘ２。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测结果表明：ＣＭ－Ｌｏｘ１和ＣＭ－Ｌｏｘ２为单链多肽，它们的分子量分别为９８ｋｄ和１０２ｋｄ。利用微量免疫法制备了ＣＭ－Ｌｏｘ１和ＣＭ－Ｌｏｘ２的抗体，制备的抗体效价达到１∶１０００倍，能检测０．５～２．０ｎｇ的抗原。免疫印迹杂交证明ＣＭ－Ｌｏｘ１和ＣＭ－Ｌｏｘ２之间存在密切的血清学关系。此外，Ａｎｔｉ－ＣＭ－Ｌｏｘ１和Ａｎｔｉ－ＣＭ－Ｌｏｘ２与水稻中另一稻瘟菌诱导性脂氧合酶ＲＬＬ以及发芽种子出现的ＲＬ－２也存在交叉反应。