板栗主要栽培品种的分子鉴别及遗传分析

摘要

应用ＲＡＰＤ 分子标记手段，研究板栗品种的遗传多样性，建立了板栗品种ＲＡＰＤ 标记的标准程序，以及板栗品种的ＤＮＡ 指纹数据库，为板栗育种提供理论依据，并为板栗品种鉴别提供了准确、可靠的标准方法，主要结果与结论如下：１板栗营养体中酚类化合物和单宁物质含量高，ＤＮＡ 提取和纯化非常困难。本研究对ＣＴＡＢ 法加以改良，总结出能够产生扩增产物的模板ＤＮＡ 提取和纯化方法。２建立了稳定的板栗ＤＮＡ 扩增反应体系。并对影响ＲＡＰＤ 反应效果和特异性的两个关键因子，即对退火温度和镁离子浓度进行研究。板栗ＤＮＡ 扩增反应体系中，反应体积为２０ μＬ。９４ ℃预变性２ ｍｉｎ ，然后执行３８ 个扩增循环，每个循环中，９４ ℃变性３０ ｓ，７２ ℃延伸９０ ｓ，最后７２ ℃延伸７ ｍｉｎ 。从Ｓ系列的Ｓ１ ～Ｓ１００ 共１００ 个引物中筛选出适合板栗基因组ＤＮＡ，能够扩增出稳定产物、扩增谱带清晰、特异性强的１６ 个引物供板栗品种ＲＡＰＤ 分析用。１６ 个引物扩增的位点总数为１１９ 个，特异性多态位点６９ 个，多态位点占总数的５８ ％ 。３研究品种间的遗传多样性。４６ 个板栗品种样品的ＤＮＡ，用１６ 个引物进行扩增反应，产生６９ 个多态位点。研究结果表明?