Izomdystrophiák differenciál-diagnosztikai vizsgálata molekuláris genetikai, valamint immunhisztokémiai és immunoblot analízisek segítségével = Differential diagnostic study of muscle dystrophies by molecular genetic, immunohystochemical and Western-blot analyses

摘要

A DMD/BMD betegségben célul tűzték ki a cDNS próbák alkalmazását a hordozósági státusz vizsgálatára és a deléciók pontos méretének meghatározására. Az újonnan bevezetett MLPA módszer segítségével a teljes dystrophin gén feltérképezésére, bizonyos pont mutációk kiszűrésére, a deléciók és duplikációk pontos analízisére, továbbá a hordozóság gyors szűrésére is vállalkozhattak. Összesen 120 beteg és 89 női hozzátartozó molekuláris analízisét végezték el a pályázat támogatásával. Az FSHD betegségben a komplex genetikai háttér miatt szükséges a molekuláris diagnosztikus kritériumok finomítása. A betegség hátterében álló epigenetikus változások kulcsfontosságúak lehetnek fenotípus kialakulásában. A betegség pathomechanizmusában a D4Z4 szekvenciáktól proximálisan elhelyezkedő gének megváltozott transzkripciójának van szerepe, amelynek vizsgálatára metilációs analízist alkalmaztak. A klinikai diagnózis megerősítésére összesen 90 beteg és 46 tünetmentes hozzátartozó DNS mintáját analizálták. Az LGMD betegségcsoport a betegek differenciál-diagnosztikája jelenleg csak specifikus fehérjedetektálási módszerekkel lehetségesek. Ezeket a módszereket alkalmazták azokban az esetekben, ahol az FSHD és DMD/BMD molekuláris genetikai vizsgálata negatív volt. A vizsgálati periódusban 122 beteg izombiopsziás mintája érkezett, ebből 56 esetben immunhisztokémiai, míg 20 esetben kiegészítő western blot analízis történt. További, DNS szintű analízisek 14 esetben azonosították a patogén mutációt. | The first aim of the study was to introduce cDNA probes for the analysis of DMD/BMD in order to detect carrier status and exact deletion borders. Additionally, the new MLPA technique was first introduced by us in Hungary and enabled the detection of the entire dystrophin gene with highlights on specific pointmutations, exact analysis of the deletions and duplications and moreover, on efficient screening of the carrier status. During the project, 120 affected persons and 89 female relatives were screened. In case of the FSHD molecular genetic criteria have to be improved because of the complexity of the disorder. Epigenetic influences may play a crutial role in modulating phenotype. Altered transcriptional activities of neighbouring genes proximal to the D4Z4 sequences have a key place in the pathomechanism, therefore, this effect was studied by methylation analysis. For confirmation of the clinical diagnosis 90 patients and 46 asymptomatic family members were genetically nalysed. The differential diagnosis of the heterogenous group of LGMD requires at first the specific analysis of the dystrophin-associated glycoproteins. This was used in the case of patients where the establishment of the genetic diagnosis of DMD/BMD or FSHD failed. Muscle biopsies and blood samples of 122 patients were sent to the laboratory; in total 56 immunohistochemical and 20 Western blot analyses have been performed. In 14 patients the exact pathogenic mutation has been identified by DNA sequencing.