转基因肿瘤细胞端粒酶活性表达人和小鼠的差异性

摘要

目的人和小鼠正常体细胞端粒酶的活性，存在着种属差异性．肿瘤细胞中端粒酶活性的变化是否亦存在种属差异性尚不清楚．因此，我们在人和小鼠的肿瘤细胞系中，分别转导细胞因子基因ＩＬ２和（或）ＴＮＦα，以观察其对肿瘤细胞增殖活性及端粒酶活性的影响．方法首先将目的基因ＩＬ２和（或）ＴＮＦα构建入ｐＬＸＳＮ或ｐＧＣＥＮ逆转录病毒载体，用脂质体法转染ＰＡ３１７细胞进行病毒包装，再以病毒颗粒分别感染ＭＫＮ２８，ＭＫＮ４５，Ｔｃａ８１１３及Ｈ２２细胞，后者经Ｇ４１８筛选、挑克隆及扩增培养，然后用ＰＣＲ，ＲＴＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ鉴定其外源基因的整合及表达，并制作细胞生长曲线，以观察肿瘤细胞增殖活性变化，同时用ＴＲＡＰＰＣＲ法观察转基因肿瘤细胞端粒酶活性变化．结果人ＭＫＮ２８，ＭＫＮ４５及Ｔｃａ８１１３转导ＩＬ２或ＴＮＦα后，肿瘤细胞增殖受到不同程度的抑制；相应地，其端粒酶活性也受到抑制．而小鼠Ｈ２２细胞转导ＩＬ２和（或）ＴＮＦα后，增殖未受抑制，端粒酶活性亦未受抑制．结论人和小鼠肿瘤细胞系中转细胞因子基因ＩＬ２和（或）ＴＮＦα后，端粒酶活性及肿瘤细胞增殖发生不同的变化，提示肿瘤细胞中端粒酶的作用机制，在人和小?