人端粒酶催化亚基在小鼠胚胎干细胞中表达以及表达人端粒酶催化亚基的转基因小鼠的鉴定

摘要

我们对在小鼠胚胎干细胞(mES)分化过程中端粒酶催化亚基的表达情况进行了初步的研究,将人端粒酶催化亚基(hTERT)转扩mES中,构建了表达人源端粒酶催化亚基的mES细胞.同时,构建hTERT的转基因载体,通过显微注射的方法获得hTERT转基因小鼠,进一步的鉴定正在进行中.通过构建表达hTERT的小鼠胎干细胞以及hTERT转基因小鼠,将为研究端粒酶催化亚基在细胞衰老、肿瘤发生中的作用以及端粒酶催化亚基可能存在的其他生物学功能上提供很好的细胞和动物模型.

目录

前言

1.实验材料和方法

1.1 菌株、细胞株与质粒

1.2 寡核苷酸引物

1.3 工具酶

1.4 ES细胞培养主要试剂

1.5 转基因动物制备所需药品、实验动物及其饲养环境

1.6 试剂盒

1.7 主要仪器设备

1.8 计算机软件包

2.方法

2.1 质粒转化，提取方法

2.2 DNA片段纯化，回收及定量

2.3 RNA定量

2.4 多菌落分组PCR筛选重组克隆

2.5 提取鼠尾DNA的方法

2.6 总RNA的提取方法

2.7 反转录PCR方法

2.8 端粒酶活性检测方法

2.9 滋养层细胞的培养

2.10 小鼠胚胎干细胞的培养

2.11 小鼠胚胎干细胞的分化实验

2.12 构建表达人端粒酶催化亚基蛋白(hTERT)的小鼠胚胎干细胞(mES)

2.13 转基因动物的制备

3.结果

3.1 小鼠端粒酶催化亚基在小鼠各组织中表达

3.2 小鼠端粒酶催化亚基在小鼠ES细胞分化过程中表达

3.3 表达人端粒酶催化亚基蛋白（Htert)小鼠胚胎干细胞的鉴定

3.4 表达人端粒酶催化亚基转基因小鼠的研制

4.讨论

5.小结

综述：端粒维持研究进展

致谢