衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp2的克隆、表达和鉴定

摘要

目的获得衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp2基因及其蛋白。方法提取噬菌体φCPG1及其核酸,用PCR技术扩增Vp2基因片段,再将其定位插入到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒。然后将重组表达质粒转化入大肠杆菌(BL-21)中,并用酶切分析、PCR扩增及部分序列测定等方法对重组质粒进行了鉴定。然后诱导表达,用SDS-PAGE及蛋白印迹进行鉴定。结果所获得的Vp2基因片段经测序,长度为561bp,检索确认其序列与Genebank一致。对重组质粒进行诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹均显示获得相对分子质量约32kDa的衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp2。结论成功表达了噬菌体衣壳蛋白Vp2,为进一步研究其作用机制和临床应用打下基础。