高度灵敏的SEB化学发光酶联免疫检测法的建立及其在多种基质中的应用

摘要

金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B，SEB）是金黄色葡萄球菌分泌的细菌外毒素。sEB引起的食物中毒在细菌性食物中毒中占有很高的比例，其半数致死剂量（LD50）约20ng／kg，半数有效剂量（ED30）约0．4ng／kg，可以致残。SEB性质稳定，易于制备，能够以气溶胶的形式散布，被美同疾病控制中心确定为B类生物战剂。因此，在食物、水源和人的体液中能检测出低剂量SEB的高灵敏度和高特异性的方法，对食品安全卫生和反恐怖战争具有十分重要的意义。我们建立了具有高度灵敏性和特异性的SEB微孔板式化学发光酶联免疫检测法（micro-plate chemiluminescent immunoassay，MP-CLEIA）。本研究中，我们使用常规方法制备了20株针对SEB分子的单克隆抗体，并进行了腹水效价测定和抗体表位鉴定，从中筛选m两株效价高、特异性强、分属不同表位组的两株单抗组成抗体配对，并对CI．EIA的反应条件进行了优化。本方法的线性动力学范围在0．0l～5ng／ml之间，实际可测的检测限（1imit of deteclion，LOD）达到0．01ng／ml，批内和批问变异均小于13％。本方法特异性强，与SEA、SEC1和SED之间不存在交叉反应，可用于不同基质中SEB的检测，如污水、自来水、河水等环境基质；烤牛肉、花生酱、熏火腿、10％脱脂奶粉、牛奶、橙汁等食品堪质；人尿液、血清等体液基质。我们建立的微孔板式CLEIA检测sEB的方法具有高特异性、高灵敏度、操作简单等优点，在公共卫生和军事侦察领域具有广阔的应用前景。