成纤维细胞系3T3细胞来源exosome对小鼠乳腺癌细胞增殖能力的影响

摘要

目的观察小鼠成纤维细胞系3T3来源的外泌小体(exosome)对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖能力的影响,并探索其中可能的机制。方法 Pure Exo Exosome提取试剂盒提取3T3细胞上清液中的exosome,按照不同浓度及时间作用于4T1细胞,CCK8法检测4T1细胞的增殖能力,Brd U/PI双掺入法测定细胞DNA合成及细胞周期;免疫印迹法(Western blot)及荧光定量实时PCR(q PCR)检测人表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor-2,EGFR2,也称HER2)及下游PI3K/AKT信号转导通路相关蛋白的变化。利用HER2单克隆抗体靶向药物赫赛汀(Herceptin),观察exosome是否影响4T1细胞对于Herceptin敏感度。结果 exosome处理组OD450吸光度值显著高于对照组(P<0.05),细胞增殖及细胞周期进程加快。Western blot及q PCR实验提示随着exosome浓度的增加,HER2表达逐渐升高,AKT磷酸化水平增加。而同时给予exosome可明显增加4T1细胞对Herceptin的敏感度。结论小鼠成纤维细胞系3T3来源exosome可促进小鼠乳腺癌细胞4T1增殖及周期进程,并且可能通过HER2激活其下游PI3K/AKT信号通路发挥上述作用。