脑特异性分子标志物vsnl1基因的克隆及原核表达

摘要

从健康BALB/c小鼠脑组织提取总RNA,逆转录获得cDNA。根据GenBank公布的视锥蛋白样基因1(vsnl1)基因序列设计引物,以鼠脑cDNA为PCR模板扩增vsnl1。将目的片段克隆至pMD18-T载体,经酶切和测序鉴定重组质粒pMDT-v。将vsnl1基因亚克隆至6×His原核表达载体pROEX-HTb,转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达和Ni-NTA柱纯化,并采样进行SDS-PAGE分析。结果表明:RT-PCR扩增产生了与vsnl1大小吻合的目的片段,测序及BLAST比对提示与已公布序列的同源性为99%,将序列提交GenBank。SDS-PAGE显示,经IPTG诱导,重组质粒pROEX-v转化菌表达了约22 ku的蛋白,与预期分子量大小一致。