人P21^WAF1/CIP1启动子荧光素酶真核表达载体的构建

摘要

目的:构建含人P21WAF1/CIP1基因启动子的表达载体pGL3-P21p。方法:以全血总RNA为模板,经RT-PCR扩增P21WAF1/CIP1基因启动子,并将其克隆到T-easy载体,测序分析,然后经酶切再克隆到pGL3-basic,构成重组真核表达载体pGL3-P21p。将pGL3-P21p转染到乳腺癌细胞株MCF7中,并检测细胞中荧光素酶的活性。结果:经测序、酶切等检测证实重组真核表达载体pGL3-P21p构建成功,荧光素酶活性检测显示P21WAF1/CIP1基因启动子对荧光酶基因表达起到了正调控作用。结论:P21WAF1/CIP1启动子荧光素酶真核表达载体的成功构建为进一步研究P21WAF1/CIP1基因启动子的表达调控奠定了基础。