三氯乙酸染毒对肝L-02细胞的增殖作用及对DNA甲基化水平的影响

摘要

目的 检测三氯乙烯（TCE）主要代谢产物三氯乙酸（TCA）对人肝L-02细胞染毒24h后的增殖作用，以及对DNA总体甲基化水平的影响，探索TCE对肝L02细胞的表型遗传毒性。方法选择0．1～0．9mmol／L浓度TCA作为合适的染毒剂量对肝L-02细胞染毒24h后分别进行下列试验：以CCK-8试剂盒观测细胞的生长曲线；以抗5-mC抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化总体水平（TCA0．9mmol／L染毒24h）；以流式细胞仪（FCM）检测其对细胞周期的影响及凋亡情况；提取细胞DNA进行琼脂糖电泳分析其对DNA的损伤作用。以上试验必要时设置5-氮杂胞苷（5-aza—dC5μmol／L）处理的L-02细胞为基因组DNA低甲基化的对照以及肝癌细胞作为细胞周期分析的对照。结果TCE在0．1～0．9mmol／L浓度下染毒24h后可以促进肝L-02细胞生长，并在0．9mmol／L浓度作用下24h可致肝L-02细胞DNA总体甲基化水平降低，荧光强度和正常细胞比较明显减弱；细胞周期分析发现TCA处理24h后再用正常培养基继续培养24h后可使细胞S＋G2期中细胞比例增加（与肝癌细胞接近）；DNA梯状电泳分析未发现DNA损伤性改变。结论TCA染毒24h可促进细胞生长，可诱导基因组DNA低甲基化，并造成细胞周期的改变，提示TCA对肝细胞的早期细胞毒性作用与表型遗传机制有关。