DNA甲基化对三氯乙烯染毒F344雄性大鼠肝毒性的影响

摘要

目的：三氯乙烯（Trichloroethylene，TCE）是环境中广泛存在的工业污染物，会引起小鼠肝癌发生率升高，但大鼠肝癌发生率无变化。本研究探讨三氯乙烯在诱发肝癌方面的种属差异的分子机制。
　　方法：三氯乙烯染毒大鼠5天，剂量为0或1000 mg/kg/day，采用DNA甲基化免疫共沉淀芯片（MeDIP-Chip）、实时荧光定量 PCR及结合重亚硫酸盐的限制性内切酶（COBRA）分析方法检测大鼠肝脏基因的DNA甲基化水平及基因表达量的变化。
　　结果：三氯乙烯染毒大鼠后虽然整体DNA甲基化状态无显著变化，但肝脏中共有806个基因DNA高甲基化，186个基因低甲基化，这些DNA甲基化基因主要与细胞内噬、MAPK、cAMP信号通路相关。大鼠肝脏内Uhrf2基因DNA高甲基化及Hadhb基因DNA低甲基化得到验证，Ihh、Cdkn1a、Jun、Myc、Sfn和Cdkn2a基因的DNA甲基化水平未见明显变化。Gata1、Ihh、Jun、Tet2、Dnmt3a和Uhrf2基因表达量显著下降；Hadhb及 Cdkn1a基因表达量显著上升；Clock、Mki67、Myc、Uhrf1及Dnmt1等基因的表达量未发生变化。
　　结论：三氯乙烯染毒大鼠肝脏中引起的DNA甲基化改变倾向于抑制肝癌形成，三氯乙烯染毒大鼠肝脏中的Uhrf1、Mki67、Jun、Cdkn1a、Ihh等基因的DNA甲基化水平及mRNA表达变化与小鼠肝脏中有很大差异，这些基因可能在三氯乙烯致肝癌的物种特异性中发挥作用。

目录

声明

引言

1.材料

1.1供试品

1.2主要试剂、试剂盒

1.3主要试剂配制

1.4主要仪器

1.5实验动物

2.方法

2.1染毒及取样

2.2组织RNA、DNA的提取及测定

2.3 DNA甲基化免疫共沉淀芯片（MeDIP-Chip） 分析

2.4实时荧光定量PCR检测（RT-PCR）

2.5结合重亚硫酸盐的测序（BSP）和限制性内切酶分析(COBRA)

2.6数据统计

3.实验结果

3.1 DNA甲基化免疫共沉淀芯片（MeDIP-Chip）分析结果（基因和基因组变化）

3.2实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测结果（mRNA表达量变化）

3.3结合重亚硫酸盐的测序（BSP）和限制性内切酶分析(COBRA)结果（特定基因甲基化水平的变化）

4.讨论

5.结论

参考文献

综述:三氯乙烯及其代谢产物的毒理研究进展

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

中英文缩写词表

附录

致谢