去甲斑蝥素对TGF-β_1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2/3表达的影响

摘要

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株(HK-2)上皮细胞间质转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)以及信号蛋白Smad2/3的影响。方法体外培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组(NCTD组)。对照组为无血清DMEM培养,TGF-β1组为TGF-β15 ng.mL-1诱导,NCTD组为不同浓度NCTD(0.5、1.0、2.5μg.mL-1)与TGF-β1(5 ng.mL-1)共同作用,各组作用时间48 h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)与Smad2、Smad3 mRNA表达;采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白质表达。结果与对照组相比,TGF-β1组α-SMA mRNA及其蛋白表达明显上调(P<0.05),E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调(P<0.05);与TGF-β1组相比,NCTD干预组α-SMA mRNA及其蛋白表达明显下调(P<0.05),而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调(P<0.05),且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Smad2、Smad3 mRNA和Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达上调(P<0.05);与TGF-β1组比较,NCTD干预组Smad2、Smad3 mRNA和Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达下调(P<0.05),具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与其下调信号蛋白Smad2/3的表达有关。