DR5来源的反义多肽FR-11的合成及其抑制TRAIL介导细胞凋亡的活性研究

摘要

目的：筛选出能影响配体TRAIL功能的死亡受体DR5来源的反义多肽。方法：依据蛋白质密码理论，编写可按参数要求进行氨基酸序列匹配比对的生物学软件，利用该软件对TRAIL（序列Ⅰ）和DR5（序列Ⅱ）进行比对。寻找两序列间的反义同源盒匹配序列。结合蛋白质和配体-受体复合物的结构信息，进一步理论筛选相互作用区域，合成可能与TRAIL作用的小分子活性肽。采用ELISA结合和竞争实验，分析所合成多肽与TRAIL的结合；在TRAIL诱导细胞凋亡实验中，分析与死亡受体竞争结合TRAIL的程度，观察多肽影响TRAIL介导细胞凋亡的生物活性。结果：经软件初筛选和理论分析，共合成10条多肽。通过ELISA结合实验筛选到一条多肽（命名为“FR-11”），能与TRAIL发生浓度依赖性的特异结合，并能抑制DR5与配体TRAIL的结合。该多肽与TRAIL97～103aa的匹配率大于50％，计算机模拟三维结构显示该序列位于DR5的胞外区，是与TRAIL结合的关键区域。细胞学实验表明：FR-11肽能够抑制TRAIL介导的SW1990细胞和L929细胞的凋亡，这种抑制作用呈FR-11浓度依赖性，而在TRAIL浓度较低时更为明显，提示能抑制TRAIL与死亡受体的结合。结论：根据蛋白质密码理论设计的软件能筛选出影响配体-受体相互作用的功能反义多肽；某些多肽能模拟受体与配体发生结合，具有抑制配体介导的生物活性。