小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达

摘要

目的　克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的P1A基因以制备肿瘤DNA疫苗。方法　用RT PCR方法制备P1A基因 ,以哺乳细胞高效表达质粒pCI neo为载体 ,构建重组DNA疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的T7和T3启动子序列为测序引物 ,用自动测序仪测序鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化 2 93细胞 ,用RT PCR法鉴定转化细胞中P1A基因的表达。结果　正确构建了P1A/pCI neo重组质粒 ,并且在转化此质粒的 2 93细胞中检测出了P1A的表达。结论　成功地构建了重组P1A/pCI neo肿瘤疫苗 。