实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立

摘要

根据GenBank（登录号：EF417996）中鸭病毒性肠炎病毒U31基因的序列，设计了1对特异性引物及TaqMan探针，扩增片段长度为76bp。以鸭病毒性肠炎弱毒疫苗株DNA为阳性标准品模板，建立了实时荧光定量PCR检测鸭病毒性肠炎病毒的方法。该方法能在鸭病毒性肠炎病毒DNA样本中检出荧光信号，定量范围为：2．1×10^0～2．1×10^0个拷贝数，最小检出量为2．1×10^0个拷贝；用该方法对人工感染试验的4只鸭组织器官、粪便、血液等样品重复测定3次，病毒模板DNA的检出率为100％，对鸭正常组织、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌和鸭病毒性肝炎、鹅源禽流感H5毒株、新城疫、小鹅瘟病毒等DNA检测不出现特异性荧光信号。经过重复性和实际临床样本检验证实，该方法真实可靠，而且从核酸提取到报告检测结果耗时不超过4h，不仅实现了对鸭病毒性肠炎的快速诊断，也实现了对该病毒DNA由定性到定量的检测。