主动外排泵外膜蛋白编码基因hefA在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

摘要

目的:研究幽门螺杆菌(Hpylori)分离株的多重耐药机制.方法:用氯霉素对临床分离株Hpylori和标准株Hpylori进行体外诱导,琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性,从而筛选出多重耐药株;实时定量PCR检测多重耐药株和敏感株中编码主动外排泵外膜蛋白的结构基因hefA的mRNA水平.通过构建hefA基因敲除株,测定敲除前后菌株对10种抗生素的敏感性.PCR扩增20株Hpylori临床分离株主动外排泵结构基因hefA和hefC.结果:经氯霉素诱导后,筛选出的耐药菌株均表现出相似的多重耐药性,6株多重耐药株hefA基因mRNA水平显著高于敏感株(5.8466±2.9370vs2.6356±1.7245,P=0.033);成功构建了hefA基因敲除株(△HpLZ1026),△HpLZ1026对4种抗生素的敏感性明显增加;所有20株临床分离株中均检测出hefA和hefC基因,未发现hefABC基因缺失株.结论:主动外排系统hefA基因高表达导致体外人工诱导Hpylori多重耐药的产生;hefABC基因在Hpylori中普遍存在,且在Hpylori多药耐药机制中起重要作用.