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中英缩略词表
第1章 引言
概述
第2章 幽门螺杆菌敏感菌株的诱导耐药实验
2.1 实验材料
2.1.1 菌株来源
2.1.2 主要试剂耗材
2.1.3 主要仪器生物安全柜
2.1.4 主要溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 临床菌株的复苏、鉴定及传代培养
2.2.2 幽门螺杆菌对左氧氟沙星和甲硝唑的MIC值检测
2.2.3甲硝唑及左氧氟沙星诱导耐药实验
2.2.4 实验菌株耐药基因gyrA及rdxA的PCR扩增及测序
2.2.5 RNA提取及荧光定量PCR检测外排泵基因表达情况
2.2.6统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1筛选菌株的MIC结果
2.3.2 左氧氟沙星诱导耐药过程中耐药基因gyrA突变情况
2.3.3 左氧氟沙星诱导耐药过程中外排泵mRNA 表达变化
2.3.4 左氧氟沙星诱导耐药过程中不同外排泵基因mRNA相关性分析
2.3.6 甲硝唑诱导耐药过程中外排泵基因mRNA 表达变化
2.3.7 甲硝唑诱导耐药过程中不同外排泵基因mRNA相关性分析
2.4 讨论
第3章 耐药基因突变对外排泵基因的影响
3.1 实验材料
3.1.1 菌株来源及细胞株
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.1.4 主要溶液的配制
3.2 实验方法
3.2.1 PCR扩增含特定gyrA基因突变及特定rdxA基因突变的序列片段
3.2.2自然转化构建耐药基因突变菌株
3.2.3耐药基因突变菌株MIC值检测
3.2.4Hoechst 33342积聚实验检测外排泵功能
3.2.5 统计学分析
3.3实验结果
3.3.1构建耐药基因gyrA突变菌株
3.3.2 耐药基因gyrA突变对左氧氟沙星MIC的影响
3.3.3 耐药基因gyrA突变菌株外排泵功能的变化
3.3.4构建耐药基因rdxA突变菌株
3.3.5 耐药基因rdxA突变对甲硝唑MIC的影响
3.3.6 耐药基因rdxA突变菌株外排泵功能的变化
3.4讨论
第4章 敲除外排泵基因除预防或逆转耐药基因突变研究
4.1 实验材料
4.1.1菌株来源及质粒
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器生物安全柜
4.1.4 主要溶液的配制
4.2 实验方法
4.2.1外排泵基因突菌株的构建
4.2.2抗菌药生长抑制实验
4.2.3Hoechst 33342积聚实验
4.2.4抗菌药刺激敲除前后菌株外排泵基因表达实验
4.2.5外排泵基因敲除后诱导耐药基因突变实验
4.2.6 耐药菌株敲除后逆转耐药实验
4.2.7 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1外排基因hefA、hefD、hefG突变株的构建
4.3.2敲除外排泵基因对外排功能的影响
4.3.3敲除外排泵基因对抗菌药的敏感性的影响
4.3.4敲除外排泵基因预防耐药突变研究
4.3.6外排泵基因hefA、hefD和hefG相互之间的影响
4.3.7敲除显著高表达的hefG对hefA、hefD的影响
4.4讨论
第5章 结论与展望
5.1结论
5.2展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述:喹诺酮类抗菌药耐药的基础与临床及其与细菌外排泵的关系
