不同方法从小鼠胚胎干细胞分化拟胚体

摘要

建立简便有效的胚胎干细胞体外分化研究中制备拟胚体的方法。本实验以3种方法形成拟胚体:滋养层过生长法、悬浮法和胶原酶处理法,并与传统的悬滴法进行了比较。在不同的分化培养体系中以最终分化出搏动的心肌细胞评价形成有分化发育能力的拟胚体的效率。以RT-PCR检测了拟胚体和心肌细胞形成中基因的表达。结果表明,4种方法分化出搏动心肌细胞的比例不同。滋养层过生长法形成拟胚体的比例接近悬滴法,而悬浮法和胶原酶处理形成拟胚体的比例显著低于滋养层过生长法和悬滴法。形态学研究显示,拟胚体发育经历了简单拟胚体阶段到囊状拟胚体或成熟拟胚体。在拟胚体成熟过程中特异性胚层分化发育分子标记HNF-4、Bmp-4与Otx-2表达上调,与心肌细胞分化相关的基因α-MHC、β-MHC、GATA-4及Nkx2.5同样表达上调。表明不同途径可获得不同比例的有发育能力的拟胚体,在体外分化研究中滋养层过生长法则是简便有效的获得正常发育拟胚体的方法。