造血干/祖细胞的体外扩增培养研究

摘要

利用旋转壁式生物反应器（Rotating wall vessel，RWV）体外培养脐带血干细胞，使其大量扩增。以满足临床应用对造血干／祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞（Mononuclear cells,MNC）在T—flask中培养24h，之后接种到RWV反应器中。培养200h。每24h细胞计数，测量培养基的pH和渗透压变化；在144h和197h测CD34^＋细胞含量并做CFU—GM半固体培养。有核细胞（Nucleated cells，NC）与CD34^＋细胞在第197h，分别扩增了435．5±87．6倍和32．7±15．6倍，CFU—GM（Colony—forming unit—granuloeyte／maerophage）细胞扩增了21．7±4．9倍。整个培养过程中。RWV反应器中的pH和渗透压都保持在造血细胞最佳的扩增条件内，pH基本保持在7．2～7．4之间，渗透压基本保持在290-310mmol／kg之间。由于旋转壁式生物反应器（RWV）结构上的特殊性，可以保证细胞在悬浮流动的状态下生长，很好地模拟了脐带中的造血微环境。使脐带血造血干细胞在该反应器中短期内得到大量扩增。