脂多糖对小鼠肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的影响

摘要

目的观察原代培养的小鼠肺成纤维细胞在不同质量浓度的脂多糖(LPS)刺激下的增殖情况并检测P27蛋白的表达情况,以明确LPS对肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的调控作用。方法将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞分为对照组、100μg/L LPS组(LPS_(100)组)、500μg/L LPS组(LPS_(500)组)和1 000μg/L LPS组(LPS_(1000)组)。对照组加入PBS,各质量浓度LPS组加入相应终质量浓度的LPS。在LPS刺激后0、24、48、72h采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组小鼠肺成纤维细胞的增殖情况。在LPS刺激后24h采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠肺成纤维细胞P27的mRNA表达水平,并通过Western印迹法和免疫荧光技术比较小鼠肺成纤维细胞经不同质量浓度LPS刺激48h后P27的蛋白质表达情况。结果不同质量浓度的LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后能引起细胞增殖,LPS刺激后24h,LPS1000组细胞增殖速率显著高于对照组(P<0.01);刺激后48h,LPS_(100)组、LPS_(500)组和LPS_(1000)组肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均<0.01);刺激后72h,LPS_(500)组和LPS_(1000)组肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均<0.01)。LPS刺激后24h,LPS_(500)组和LPS_(1000)组P27的mRNA表达水平均显著低于对照组(P值分别<0.05、0.01)。LPS刺激后48h,Western印迹法和免疫荧光实验结果显示,LPS_(100)组、LPS_(500)组和LPS_(1000)组的P27的蛋白质表达量和绿色荧光强度均显著低于对照组(P值分别<0.05、0.01、0.01)。结论肺成纤维细胞的增殖可能是LPS诱导的脓毒症相关性肺纤维化发生的机制之一,该过程可能与P27蛋白表达下调有关。