cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变菌株的构建及鉴定

摘要

目的:构建cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株.方法:运用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(kmR)连接到PCR扩增cagA基因两端区域产生的2个基因片段之间,并共同插人到pBluescriptSKⅡ(-)载体的多克隆位点中,构建出带卡那霉素抗性标志的缺失突变载体pBs-cagA-mutant.将突变载体转化到含完整cagA基因的突变受体MEL-Hpylori27菌株中.卡那霉素筛选出cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株,并经PCR和DNA测序鉴定.结果:构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示,产生的条带与设计结果完全一致.PCR方法扩增突变株cagA,kmR基因显示,cagA基因已被完整敲除掉,DNA测序证实筛选得到了cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.连续培养25代后证实,幽门螺杆菌突变株具有良好稳定性.结论:首次成功构建出1株中国人来源的、cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.