杆状病毒早期基因启动子载体的构建及报道基因的表达

摘要

以ＡｃＮＰＶｐ１０基因为侧翼序列，用ＡｃＮＰＶ的ＩＥ１基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体，并将新霉素抗性基因（ｎｅｏ）插入ＩＥ１基因启动子下游，得到转移载体ｐＡｃＰＩｎｅｏ。将它和野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９，由于ｎｅｏ基因的表达，通过Ｇ４１８的选择和富集作用，得到重组病毒ｖＡｃＰＩｎｅｏ的纯培养。用酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证明，ｎｅｏ基因整合于ＡｃＮＰＶ基因组的ｐ１０基因位相。用重组病毒感染昆虫细胞，不同时间取样提取ＲＮＡ并进行杂交，结果表明ｎｅｏ基因在受染细胞内从早期到晚期都可发生转录。