猪繁殖和呼吸综合征病毒基质膜蛋白和核衣壳蛋白基因的克隆与鉴定

摘要

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列，设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物，并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点，经ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了一约９５０ｂｐ的目的基因片段，并将此基因克隆于ＰＢＶ２２０载体，构建了ＭＮ蛋白基因重组质粒ＰＢＶＭＮ，进一步由重组质粒回收ＭＮ基因片段亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋）测序载体，构建了重组质粒ＰＢＳＭＮ，经部分序列分析鉴定，重组质粒含ＭＮ蛋白基因。此基因的克隆为进一步研究该病毒ＭＮ蛋白免疫学特性及其分子基础和基因诊断技术奠定了基础。