卵泡抑素样蛋白1在胃间质瘤生长和凋亡中的作用

摘要

目的研究卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)在胃间质瘤中的表达及其功能。方法采用ELISA法检测27例胃间质瘤患者手术前后和32名健康志愿者血清中FSTL1的表达。Western印迹法检测FSTL1在胃间质瘤组织、正常胃黏膜上皮组织、胃间质瘤细胞株GIST882和人正常胃黏膜上皮细胞株RGM-1中的含量。以FSTL1 mimic或FSTL1小干扰RNA(siRNA)瞬时转染GIST882细胞上调或抑制FSTL1蛋白质的表达,并设立各自阴性对照(NC)和空白对照(BC)组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞,以及加入伊马替尼后各组细胞的活力;平板克隆形成实验观察GIST882细胞形成细胞克隆的能力。流式细胞术检测FSTL1 siRNA及其对照组的细胞周期和早期凋亡率;Western印迹法检测细胞周期相关蛋白,包括周期素E(Cyclin E)、E2F-1、p-Rb、p53和p73;细胞凋亡相关蛋白,包括细胞色素C、Bax、bcl-2、半胱天冬酶(caspase)-3和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP);细胞通路蛋白,包括磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)和NF-κB抑制蛋白(IκB)的表达。结果胃间质瘤患者术前血清FSTL1相对表达量(27.3±3.4)显著高于健康志愿者(19.5±3.2,P<0.01);在接受胃间质瘤手术后,患者血清中FSTL1相对表达量(14.6±2.6)较术前显著下调(P<0.01)。FSTL1蛋白的表达水平在胃间质瘤组织中显著高于正常胃黏膜上皮组织,在GIST882细胞中显著高于RGM-1细胞(P值均<0.01)。抑制FSTL1表达可抑制GIST882细胞活力,而上调FSTL1表达可提高GIST882细胞活力。抑制FSTL1表达可使GIST882细胞生长和增殖受到抑制;GIST882细胞周期停滞在G1期;同时下调Cyclin E、E2F-1和p-Rb的表达,上调p53和p73的表达;并诱导GIST882细胞发生凋亡,同时促进细胞中细胞色素C、Bax、裂解的PARP和裂解的caspase-3的表达,并抑制bcl-2的表达;FSTL1 siRNA组GIST882细胞中p-ERK和p-AKT表达下调,与siRNA NC和siRNA BC组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。加入伊马替尼后,FSTL1 siRNA组细胞活力显著低于siRNA NC组(0.622±0.134比1.121±0.189,P<0.01)。结论FSTL1在胃间质瘤中表达显著上调,FSTL1与胃间质瘤细胞生长和凋亡相关。抑制FSTL1的表达可增加GIST882细胞对伊马替尼的敏感性。