温州蜜柑萎缩病毒提纯与抗血清制作及其应用

摘要

采用洋酸浆（Ｐｈｙｓａｌｉｓｆｏｒｉｄａｎａ）繁殖温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ），改进提纯方法，经５％一２５％酒石酸钾密度梯度离心获得的提纯制剂，在２２０一３００ｎｍ下呈单一吸收峰曲线，峰在２５９ｎｍ，谷在２３７ｎｍ，ＯＤ＿（２５９）／ＯＤ＿（２３７）＝１．６０，ＯＤ＿（２５９）／ＯＤ＿（２８０）＝１．７３。病毒得率约为１３ｍｇ／ｋｇ病叶。电镜观察各视野布满了直径约２６ｎｍ的球状病毒颗粒。病毒粒子外壳蛋白有两个组分，分子量分别约为４６ｋＤ和２３ｋＤ。免疫兔血清用Ａ蛋白ＤＡＳ一ＥＬＢＡ法简称ＰＡＳ一ＥＬＢＡ测得效价为１／８１“９２０一１／１６３”８４０，用微量沉淀法测得效价为１／２“５６０一１／５”１２０。用此血清对各地从日本引进的温州蜜柑品系及重庆市柑桔良种无病毒繁育计划中的甜橙、柚等品种共９４个样品进行测定，同时用日本制备的ＳＤＶ抗血清和柑桔花叶病毒（ＣｉＭＶ）抗血清进行比较鉴定。自制ＳＤＶ抗血清检测结果和日本抗血清及草本指示植物（白芝麻）检测结果一致。此外，对宫本特早熟温州蜜柑茎尖嫁接苗检测１８样次，确认了脱毒效果。对ＳＤＶ是否可根传作了６年观察检测，明确其未能根传。