野生型K-ras2诱导结肠癌细胞基因表达谱改变的特征分析

摘要

目的：应用基因芯片技术,检测野生型K-ras2基因在结肠癌Caco2细胞中表达诱发的基因谱改变,进一步阐明野生型K-ras2基因可能的分子生物学功能.方法：抽取正常人的静脉血,提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板,采用PCR方法克隆K-ras2野生型全编码cDNA序列.以常规的分子生物学技术将获得的K-ras2 cDNA克隆到T Easy载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pCI-neo-K-ras2,以脂质体转染结肠癌细胞系Caco2,提取mRNA逆转录为cDNA与转染空白表达载体pCI-neo的Caco2细胞进行cDNA芯片分析.结果：构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定证实准确无误,提取高质量的RNA逆转录为cDNA进行DNA芯片技术分析.在135个差异表达基因中发现有24个基因表达水平显著上调,121个基因表达水平显著下调.差异表达基因与细胞增殖、分化、凋亡和信号传导等有关.结论：应用基因表达谱芯片技术成功筛选了野生型K-ras2转染结肠癌细胞后差异表达基因,反映出野生型K-ras2对细胞增殖、代谢、转录调控等过程的负性调控状态,为进一步阐明野生型K-ras2可能的生物学功能提供了新的线索.