稳定沉默PKM2基因表达的结肠癌细胞株的制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种稳定沉默PKM2基因表达的结肠癌细胞株的制备方法，包括人PKM2基因的shRNA慢病毒表达载体的构建，慢病毒的包装、收获，DLD1结肠癌细胞慢病毒感染，稳定细胞株嘌呤霉素筛选和Real-time PCR、Western blot鉴定。实验结果证明，shRNA寡核苷酸序列可成功插入pLKO.1-puro表达载体中，且对PKM2基因表达的抑制效果显著、持续且稳定。制得的细胞株为研究PKM2在大肠癌细胞能量代谢、增殖、迁移和炎症等恶性特征中的调控作用提供实验材料。