结肠癌细胞组织因子/活性凝血因子Ⅶ通路活化后的基因表达谱改变

摘要

目的利用人类全转录组基因芯片技术检测人SW620结肠癌细胞组织因子/活性凝血因子Ⅶ（TF/FⅦa）通路激活后表达谱改变,探讨该通路下游机制。方法提取TF/FⅦa通路活化组与空白对照组的人结肠癌SW620细胞总RNA进行全转录组基因芯片杂交,筛选差异表达基因,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）验证结果,进行差异基因及相关通路网络分析;RT-qPCR检测结肠癌细胞SW620、SW480、LoVo、HCT116的TF/FⅦa通路活化后表皮生长因子受体（EGFR）配体双调蛋白（AREG）、表皮调节素（EREG）、肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）、转化生长因子-α（TGF-α）、β-细胞素（BTC）、表皮生长因子（EGF）、上皮细胞有丝分裂蛋白（EPGN）的基因表达改变。结果 TF/FⅦa通路活化组较对照组上/下调≥1.5倍的基因共263个,其中上调150个,下调113个;网络分析提示层粘连蛋白-整合素系统、糖代谢通路网络和恶性肿瘤通路网络与TF/FⅦa通路活化密切相关;SW620细胞TF/FⅦa通路活化后EGFR配体AREG、EREG、HB-EGF、TGF-α基因表达呈时间依赖的上调趋势,于12 h达峰值,相对表达量分别为0.92±0.13比5.50±0.91（P=0.000）,1.00±0.15比2.17±0.44（P=0.002）,1.11±0.08比1.73±0.32（P=0.005）,0.94±0.12比1.49±0.09（P=0.002）;TF/FⅦa通路活化6 h,SW480细胞的AREG、BTC基因表达显著上调,相对表达量分别为1.00±0.25比2.19±0.60（P=0.033）,1.00±0.23比4.41±0.56（P=0.001）,EPGN基因未检测到;LoVo细胞的AREG、BTC显著上调,EGF显著下调,分别为1.00±0.19比1.87±0.39（P=0.025）,1.00±0.01比1.86±0.06（P=0.000）,1.00±0.08比0.68±0.16（P=0.035）;HCT116细胞的AREG、EREG、HB-EGF、TGF-α、EGF均显著上调,分别为1.00±0.09比1.38±0.06（P=0.004）,1.00±0.02比1.14±0.03（P=0.003）,1.00±0.03比1.85±0.11（P=0.000）,1.00±0.05比1.26±0.10（P=0.015）,1.00±0.26比1.91±0.22（P=0.010）。结论结肠癌细胞中TF/FⅦa通路活化后可引起层粘连蛋白-整合素系统、糖代谢通路网络及恶性肿瘤通路网络和EGFR通路相关的基因表达改变,这些基因和通路可能在结直肠癌TF/FⅦa通路相关生物效应中发挥关键作用。