恶性疟原虫有性期特异抗原Pfs48/45基因的克隆与部分序列分析

摘要

目的：构建恶性疟原虫海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株有性期特异抗原Ｐｆｓ４８／４５，为研制恶性疟原虫传播阻断疫苗提供抗原。方法：根据Ｐｆｓ４８／４５基因编码区序列设计引物，用ＰＣＲ扩增ＤＮＡ，并进行序列分析，双酶切后，定向克隆入ｐｃＤＮＡ３载体，转化大肠杆菌ＴＧ１，随机取出氨苄青霉素抗性菌落进行ＰＣＲ扩增，用碱裂解法抽提阳性的重组子ＤＮＡ，双酶切鉴定。结果：特异扩增了编码Ｐｆｓ４８／４５全基因序列（１３６３ｂｐ）；用５端寡核苷酸引物测定了４５０个碱基，结果表明ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５５端基因序列与ＮＦ５４株相应基因基本一致，仅在第３０７（Ｔ→Ｃ）和３７２（Ｔ→Ｃ）位碱基存在置换；第３７２位碱基置换产生新的酶切位点ＴａｑＩ，进一步用ＴａｑＩ消化ＰＣＲ扩增产物，产生两个大小分别为９８４ｂｐ和３７９ｂｐ的酶切片段，测序和酶切结果均证实扩增的目的基因确为Ｐｆｓ４８／４５基因；将纯化的目的基因片段正向插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点。结论：我国海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５抗原基因序列与ＮＦ５４株相应基因高度同源；成功构建重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆｓ４８／４５。