恶性疟原虫海南FCC1/HN株有性期特异抗原Pfs25基因的克隆和序列分析

摘要

利用ＰＣＲ扩增技术从恶性疟原虫海南ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组中特异扩增编码Ｐｆｓ２５抗原全基因序列，扩增产物经纯化回收后，用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法进行ＤＮＡ序列测定，结果显示ＦＣＣ１／ＨＮ株Ｐｆｓ２５基因序列与ＮＦ５４株者基本一致，仅在第３９２位碱基存在置换（Ｇ→Ｃ）和该密码子编码的氨基酸的变化（１３ｌａａ：Ｇｌｙ→Ａｌａ），进一步的酶切位点分析显示该位点碱基置换产生新的ＰｓｔⅠ酶切位点（３９３），再用ＰｓｔⅠ消化纯化的ＰＣＲ产物，产生２条大小分别为３９３ｂｐ和２７０ｂｐ的ＤＮＡ片段，测序和酶切结果都证实扩增的目的基因确为编码有性期特异抗原Ｐｆｓ２５基因。另将纯化的ＰＣＲ产物用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ双酶切后，定向克隆入ｐｃＤＮＡ３载体，转化大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１，随机挑取氨苄青霉素抗性菌落进行ＰＣＲ扩增验证和用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ双酶切鉴定，结果证明重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆｓ２５含有编码Ｐｆｓ２５抗原基因。