梅花鹿正常朊蛋白特异性片段的高效表达和纯化

摘要

根据梅花鹿正常朊蛋白基因序列设计特异引物，采用PCR方法扩增出梅花鹿正常朊蛋白特异性基因片段PRNP（67～699），将该基因克隆至pGEX-6p-1载体中，构建pGEX-6p-1-PRNP原核表达质粒。将重组质粒转化至Rosetta—gami（DE3）受体菌中，IPTG（1．0mmol／L）37℃诱导培养4h，经SDS-PAGE和Western—blotting鉴定，结果表明目的蛋白获得高效表达。通过GST—ResinKit纯化，得到质量浓度为417．8mg／L的蛋白，并具有抗原性。