雷公藤红素对白血病细胞Akt信号通路的影响及在细胞凋亡中的作用

摘要

目的研究雷公藤红素(celastrol)对人类白血病细胞株K562细胞Akt信号通路的影响及其作用。方法应用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V/PI双标法、Hoechst33258染色法和DNA ladder法检测细胞凋亡,Western Blot法检测Caspase家族成员及Akt信号通路相关蛋白在雷公藤红素作用前后的表达或磷酸化情况,并进一步分析其对雷公藤红素诱导细胞凋亡作用的影响。结果雷公藤红素以剂量-时间依赖性方式抑制K562细胞增殖,其24h半数抑制量(IC50)是(2.15±0.11)μmol/L;并以剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡,2.0μmol/L雷公藤红素处理24h后出现明显的DNA剪切现象,伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中伴随Caspase-3、8的活化,50μmol/L Caspase抑制剂z-VAD-fmk可阻断雷公藤红素作用的K562细胞凋亡。雷公藤红素降低K562细胞Akt信号通路中p-Ak,t Survivin和Bcl-2的表达,25μmol/LWORT(PI3K-Akt抑制剂)可显著提高雷公藤红素诱导K562细胞凋亡的作用。结论雷公藤红素显著抑制K562细胞增殖,通过活化Caspase途径诱导K562细胞凋亡。雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中伴Akt磷酸化水平的降低,雷公藤红素参与PI3K-Akt抑制剂协同诱导K562细胞的凋亡。