CLDN6对胰腺癌细胞增殖的影响及其在胰腺癌组织中的表达和临床意义

摘要

目的分析紧密连接蛋白6(CLDN6)在人胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌患者临床病理特征的关系,探究其对人胰腺癌细胞增殖及相关上皮细胞-间充质转化(EMT)蛋白表达的影响。方法选取2014年1月至2018年6月在郑州大学附属洛阳中心医院行手术切除的50例胰腺癌组织及癌旁组织,免疫组织化学法及qRT-PCR法检测50例胰腺癌组织及对应癌旁组织中CLDN6的表达情况,分析其与患者临床病理特征及预后的相关性;qRT-PCR法检测胰腺癌细胞株(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、PANC-1、HPAC、Hs 766T、MIA Paca-2)及正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中CLDN6的表达。胰腺癌细胞株脂质体转染CLDN6 siRNA沉默基因,qRT-PCR检测转染情况;MTT法、平板克隆实验检测各胰腺癌细胞增殖及克隆形成能力;Western blotting检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形纤维蛋白(VIM)及纤维连接蛋白(FN)的表达水平。结果胰腺癌组织中CLDN6表达水平为(19.44±1.22),明显高于癌旁组织的(1.35±0.71),差异有统计学意义(P=0.001),其表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理学类型、肿瘤部位及CA19-9水平无关(P>0.05),而与TNM分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。CLDN6阳性表达胰腺癌患者的中位生存期为8.993个月,短于阴性表达者的18.402个月,差异有统计学意义(P<0.05)。各胰腺癌细胞株中CLDN6表达量均高于HPDE细胞株(均P<0.05),成功构建沉默CLDN6的胰腺癌细胞AsPC-1-si-CLDN6、BxPC-3-si-CLDN6,转染CLDN6 siRNA沉默质粒的AsPC-1及BxPC-3细胞的增殖能力及克隆形成能力较转染前明显降低,E-cadherin表达明显增高,而N-cadherin、VIM及FN表达明显降低(均P<0.05)。结论CLDN6在胰腺癌中高表达,且与患者临床特征及预后相关,其可促进人胰腺癌细胞增殖及克隆形成,机制可能与其促进上皮细胞-间充质转化有关。