MAGE-1与结核杆菌HSP70融合基因的构建及原核表达

摘要

目的 构建结核杆菌HSP70与肿瘤抗原MAGE-1的融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并通过GST纯化系统进行分离纯化。方法 利用PCR方法扩增TBHSP70基因,经测序后连入原核表达载体pGEX-4T-1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因片段(289～927 bp),测序后插入TBHSP70基因的5’端,构建NAGE-1与TBHSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-MACE-1-TBHSP70,含有该质粒的大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化。结果 成功地扩增了TBHSP70基因与MAGE-1基因片段,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;成功地构建了pGEX-MAGE-1-TBHSP70原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌DH5α经IPTC诱导后表达一M_r约为125000的蛋白,经GST融合蛋白表达系统纯化,得到了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白。结论 成功地获得了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白,为研究MACE-1-TBHSP70融合蛋白在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。