酶标雌二醇的制备及三种凝胶层析的结果比较

摘要

目的：制备辣根过氧化物酶标雌二醇复合物，并比较不同孔径葡聚糖凝胶对复合物纯化的效果。酶标雌二醇既保留一部分酶活性又可与雌二醇抗体结合，而且这种免疫活性可被自由的雌二醇竞争。方法：我们在国内首次用雌二醇－１７－半琥珀酸与氯甲酸异丁酯在三正丁胺存在下生成活化酯衍生物，然后与辣根过氧化物酶的游离氨基缩合，制备出复合物，再分别经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０，Ｇ－７５，Ｇ－２００分离纯化，得到使用效果满意的酶标雌二醇复合物。结果：用三种凝胶均可将游离的雌二醇除去，Ｇ－２００纯化所得酶标物在同样的工作浓度（５ｍｇ／Ｌ）下，较Ｇ－７５及Ｇ－５０纯化的酶标物计数高。结论：本实验室在国内首次制备出了Ｅ２－１７－Ｈｅｍｉ－ＨＲＰ，经酶联鉴定使用效果令人满意。