酶标雌二醇的制备及三种凝胶层析的结果比较

摘要

目的：制备辣根过氧化物酶标雌二醇复合物，并比较不同孔径葡聚糖凝胶对复合物纯化的效果。酶标雌二醇既保留一部分酶活性又可与雌二醇抗体结合，而且这种免疫活性可被自由的雌二醇竞争。方法：研究人员在国内首次用雌二醇一17一半琥泊酸与氯甲酸异丁酯在三正丁胺存在下生成活化酯衍生物，然后与辣根过氧化物酶的游离氨基缩合，制备出复合物，再分别经Sephadex G-50，G-75，G-200分离纯化，得到使用效果满意的酶标雌二醇复合物，结果：用三种凝胶均可将游离的雌二醇除去，G-200纯化所得酶标物在同样的工作浓度（5mg／L）下，较G-75及G-50纯化的酶标物计数高。结论：该实验室在国内首次制备出了E2-17-Hemi-HRP，经酶联鉴定使用效果令人满意，该文就不同孔径大小的凝胶对纯化的影响做了详细的论述。