用单个特异引物扩增桃ACC氧化酶cDNA及其在大肠杆菌中的表达

摘要

用单个特异引物和通用引物ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃受伤叶片ｃＤＮＡ中扩增出１．３ｋｂ左右大小的片段．将该扩增产物克隆并对重组克隆作酶切分析发现至少可分为３类．用桃ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ为探针进行点杂交表明，４，７，９，１０，１１，１２重组质粒能与之杂交，其中７，９，１０，１１，１２号重组质粒酶切图谱与已报导的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ基因基本一致，而４号克隆则不同．ＤＮＡ序列分析和ＰＣＲ鉴定表明，插入片段均由５′端特异引物单个引物扩增出来，对７号重组克隆插入片段ＤＮＡ全序列分析表明，７号重组克隆插入片段全长１１４６ｂｐ，包含了除启始密码子外的全部编码区和１９２ｂｐ的３′端非编码区．通过补上起始密码子ＡＴＧ构建重组表达载体。