乙基亚硝基脲诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失

摘要

目的探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量乙基亚硝基脲(ENU)诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合性缺失(LOH)进行分析,为环境致突变剂检测和突变机制研究提供依据。方法使用乙基亚硝基脲10μg/mL和100μg/mL剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性、细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮生长率和突变频率等。挑选经ENU诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,应用等位基因特异性PCR扩增、杂合性缺失分析等技术,分析其杂合性缺失的发生。结果低剂量和高剂量诱导突变体的tk基因LOH发生率分别为73.5%和69.1%。LOH分析结果显示,诱导突变体的LOH在大集落与小集落之间差异具有显著性(P<0.05)。结论功能性等位基因缺失是ENU诱导tk基因分子突变的重要形式之一,不同剂量可能具有不同的突变机制。