HCV非结构蛋白(NS2/NS3)基因表达载体的构建及其一级结构分析

摘要

应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，从ＨＣＶ感染者血清中扩增编码ＨＣＶ病毒蛋白酶的ＮＳ２－ＮＳ３ｃＤＮＡ片段，在其５′和３′端分别引入ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ限制性内切酶位点，定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，构建重组载体ｐｃＤＮＡ－ＮＳ２３，重组表达载体经限制性内切酶消化鉴定．用ＳＰ６和Ｔ７通用引物对目的基因片断进行序列分析．序列同源性分析结果表明，与ＨＣＶ－Ｊ、ＨＣ－Ｃ２有高度的同源性，与ＨＣＶ－１、ＨＣＶ－Ｊ６、ＨＣＶ－Ｊ８同源性差，提示所克隆的基因属ＨＣＶⅡ型．该区内重要的功能位点如Ｚｎ２＋依赖性金属蛋白酶催化中心。