重组大鼠肾胆绿素还原酶在大肠杆菌中表达和纯化方法的研究

摘要

目的　确定重组大鼠肾胆绿素还原酶在大肠杆菌中的表达条件及纯化方法。方法　将已构建的大鼠肾胆绿素还原酶 (BVR)的重组质粒pMW172a -BVR转入大肠杆菌BL - 2 1,分析不同温度、摇床转速对BVR表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超速离心、盐析、层析的方法纯化BVR。检测酶活性。结果　确定了BVR可溶性表达最佳条件为 37℃ (12 0± 5 )r/min ;确定了BVR具体纯化路线。所得蛋白纯度为 92 2 %、纯化倍数为 4 3倍、回收率为 19 8%的活性BVR蛋白。结论　获得了纯度高、具有活性的BVR蛋白 ,可作为工具酶用于某些相关酶的研究 。