重组NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中的表达和纯化

摘要

目的　在大肠杆菌中表达重组NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶 (CPR)并纯化获得有活性的CPR蛋白。方法　将已构建的NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶重组质粒pMW1 72a CPR采用温和转化法转入大肠杆菌BL 2 1中 ,依次使用超速离心、DE5 2纤维素阴离子交换层析和 2′ 5′ADP亲和层析的方法纯化CPR ,并检测酶的活性。结果　获得了纯度达 99%以上的可溶性CPR蛋白 ,纯化倍数 5 .2 0倍 ,检测酶的比活性为每分钟 1 0 4 5 .4 9nmol mg。结论　获得了纯度高、有活性的CPR蛋白 ,可作为工具酶用于某些相关酶的研究 。