siRNA真核表达载体的构建及其对CXCR4基因的沉默效应

摘要

目的构建趋化因子受体(CXCR 4)特异性siRNA(small interfere RNA)真核表达载体,体外观察对CXCR 4基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术,将合成的特异性CXCR 4 RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体pSUPER,构建CXCR 4 siRNA真核表达载体。以脂质体法将pSUPER空载体和2个(pSUPER/CXCR 4-siRNA 0和pSUPER/CXCR 4-siRNA 1)重组质粒分别导入具有高转移特性的MDA-MB-2 3 1乳腺癌细胞系,检测各组乳腺癌细胞内CXCR 4 mRNA及蛋白的表达情况。结果成功构建CXCR 4 siRNA真核表达载体.转染CXCR 4 RNA干扰片段的乳腺癌细胞,7 2 h后CXCR 4 mRNA及蛋白表达下调,抑制作用明显。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显下调CXCR 4 mRNA及蛋白的表达,为应用于乳腺癌的治疗研究提供了一定的实验基础。