Klotho在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的表达研究

摘要

目的:探讨Klotho mRNA及蛋白在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化中的表达变化。方法:体外培养大鼠原代VSMCs,利用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测不同浓度磷刺激条件下VSMCs的增殖情况。高磷培养基(3 mmol/L)刺激细胞3 d或6 d后,采用茜素红染色评估VSMCs钙化情况,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatases,ALP)试剂盒和钙含量试剂盒分别检测细胞内ALP活性和钙含量,实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白印迹法检测钙化相关蛋白骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2)和Klotho mRNA及蛋白的表达变化。结果:培养基磷浓度升高抑制了VSMCs增殖;而高磷刺激VSMCs 6 d后,茜素红染色可见钙化结节明显形成,细胞内钙含量显著增加[(1.52±0.14)mmol/g比(0.03±0.01)mmol/g,P=0.043],成骨相关蛋白BMP-2、Runx2的mRNA和蛋白表达均增加,而Klotho的mRNA和蛋白表达均下降。结论:高磷可刺激VSMCs钙化形成和表型转换,Klotho可能参与了高磷诱导的VSMCs钙化机制。