环介导等温扩增技术检测炭疽芽孢杆菌的研究

摘要

目的 建立环介导等温扩增技术（loop mediated isothermal amplification, LAMP）检测炭疽芽孢杆菌。方法 应用Primer Explorer V5软件设计针对炭疽杆菌的保守区引物，建立LAMP检测方法，检测其特异度和灵敏度，并与荧光定量PCR法进行比较。采用荧光定量PCR法、LAMP和细菌培养鉴定，对45份炭疽疫情标本进行检测。结果 LAMP、荧光定量PCR法和细菌培养鉴定的检测结果差异无统计学意义（χ~2=3.202,P=0.229）。LAMP扩增产物通过紫外凝胶成像系统显示，炭疽芽孢杆菌强毒株和弱毒株均呈现特异性梯状条带，而其他菌株如痢疾志贺菌、肠炎沙门杆菌和金黄色葡萄球菌等菌株电泳均无条带，扩增结果为阴性。LAMP与荧光定量PCR法检测炭疽芽孢杆菌的检测限均为4.0×10~2CFU/ml。结论 LAMP使用恒温水浴箱进行等温扩增，反应结束后可在可见光或紫外灯下肉眼观察结果。LAMP灵敏特异，简单快速，无需特殊仪器，可广泛用于基层实验室甚至疫情现场。