目的探讨配对相关同源框1(PRRX1)基因沉默对前列腺癌耐药细胞多西他赛(DTX)敏感性的影响及可能机制。方法临床收集35例DTX化疗敏感患者(DTX-S)和29例DTX化疗耐药患者(DTX-R)的癌组织。采用qRT-PCR法检测癌组织中PRRX1 mRNA表达水平。体外培养人前列腺癌PC-3细胞,采用DTX浓度递增间断刺激法建立DTX耐药细胞株PC-3/DTX。采用qRT-PCR法和Western blotting法检测耐药株PC-3/DTX及其亲本PC-3细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平;通过siRNA沉默PC-3/DTX细胞PRRX1基因表达,采用qRT-PCR和Western blotting检测转染后PC-3/DTX细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平;DTX干预转染后PC-3/DTX细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI);采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞中cleaved caspase-3、p-mTOR、mTOR、Beclin-1和LC-3蛋白表达水平。结果DTX-R癌组织中PRRX1 mRNA表达水平高于DTX-S癌组织(6.59±1.49 vs 1.07±0.34),差异有统计学意义(F=656.401,P<0.05)。耐药细胞株PC-3/DTX及其亲本PC-3细胞对不同浓度DTX作用24 h后的IC50值分别为(89.88±6.86)nmol/L和(15.56±1.45)nmol/L,RI值为5.78。耐药细胞株PC-3/DTX中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平高于其亲本PC-3细胞(mRNA:9.22±1.50 vs 1.00±0.17;蛋白:0.50±0.04 vs 0.08±0.02),差异有统计学意义(F_(mRNA)=59.05,F_(蛋白)=171.70,P<0.05)。PRRX1基因沉默后,PC-3/DTX细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平降低(mRNA:1.01±0.02 vs 0.98±0.04 vs 0.22±0.10;蛋白:0.62±0.01 vs 0.61±0.01 vs 0.11±0.01),差异有统计学意义(F_(mRNA)=122.01,F_(蛋白)=554.53,P<0.05)。沉默PRRX1基因可降低PC-3/DTX细胞对DTX的耐药性,促进细胞凋亡,并上调p-mTOR和cleaved caspase-3水平,下调Beclin-1和LC-3蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默PRRX1基因表达可增强前列腺癌耐药细胞株PC-3/DTX对DTX的敏感性,其机制可能与激活mTOR信号通路进而抑制细胞自噬有关。
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