高效液相色谱-紫外可见检测器检测大鼠肝组织中的还原型谷胱甘肽

摘要

目的建立一种高效液相色谱-紫外可见检测器测定大鼠肝组织中还原型谷胱甘肽含量的方法。方法肝组织在冰浴条件下匀浆后经乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液在硼酸缓冲液中与荧光剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)进行衍生化反应。流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(23∶77,V/V),流速1.0mL/min,检测波长470nm,进样量10μL;采用外标法定量。结果还原型谷胱甘肽在0.200～125μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9999(n=5),最低检测限为0.0400μg/mL(S/N=3);样品加标回收率为96.2%～104.5%;日内相对标准偏差为1.1%～4.6%,日间标准偏差为1.9%～7.5%。结论本方法操作简便,快速,准确,灵敏度高,稳定性好,适合肝组织中还原型谷胱甘肽的测定。