高效液相色谱-二极管阵列/荧光检测器串联法同时测定化妆品中8种性激素的研究

摘要

性激素(包括雌激素、雄激素、孕激素)是一种类固醇激素，具有控制附性器官和第二性征的生理功能。使用添加性激素的化妆品，短时间内可有增加皮肤弹性、美白、除皱等功效，但长期使用会导致色素沉积、皮肤萎缩及人体代谢紊乱，甚至具有致癌性。鉴于化妆品的安全性问题，我国和欧盟等相继出台相应的标准和法规，规范化妆品中性激素的使用，我国在《化妆品卫生规范》2007版中还推荐了性激素的测试方法。为满足日益增多的性激素组分的监测，各国科学家也在积极寻求更加快速灵敏的分析方法。
　　本论文综合考虑了现有的化妆品中性激素的分析方法和市售化妆品中性激素组分的添加频率，选取了较具代表性的雌三醇、雌二醇、睾酮、炔雌醇、己烯雌酚、乙酸甲地孕酮、孕酮和丙酸睾酮8种性激素作为研究对象，系统地研究了其前处理和检测方法。在前处理方法的选择上，针对溶液状和乳膏状化妆品采用了不同的前处理方法；在测试方法的选择上，采用高效液相色谱-二极管阵列/荧光检测器串联法作为测试手段。通过优化前处理方法和色谱条件，建立了化妆品中8种性激素的简便、快速、灵敏的HPLC-DAD/FLD测试方法。
　　本论文的主要研究内容及研究结果包括：
　　1.本论文以超声辅助萃取作为手段，分别建立了溶液状化妆品和乳膏状化妆品的前处理方法。通过考察不同提取溶剂和不同提取时间等对性激素的提取效果发现，溶液状化妆品样品经甲醇超声提取，萃取液可直接用于HPLC测定；而对于基质更为复杂的乳膏状化妆品，甲醇超声提取的萃取液需经固相萃取小柱净化方能进行HPLC检测，并优化了固相萃取淋洗液和洗脱液及固相萃取条件。
　　优化的溶液状化妆品前处理条件为：以甲醇为提取溶剂，超声提取20min；乳膏状化妆品前处理条件为：饱和氯化钠溶液分散样品后，以甲醇为提取溶剂，超声提取20 min，提取液过Waters Oasis HLB小柱净化，以30％甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，再用甲醇洗脱并收集洗脱液。
　　2.通过考察色谱柱、流动相种类及配比以及洗脱程序、柱温、流动相流速、进样量和检测波长等对性激素化合物的分离和响应值的影响，建立了8种性激素的液相色谱-二极管阵列/荧光检测法。确立的色谱条件为：以Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱作为分离柱，乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，DAD采用196nm、242nm和288nm多波长同时检测。为了避免采用单一的DAD检测产生假阳性现象，在激发波长280nm、发射波长310nm的条件下，同时进行了FLD检测。以色谱峰的保留时间定性和外标法定量，实现了8种性激素20min内的同时测定。
　　本论文建立测试方法的方法检出限为0.1~0.5μg/g，平均加标回收率为90.3%~102.9%(n=6)，相对标准偏差为0.4%~4.8%(n=6)。方法快速、简便、灵敏、准确。所建立的前处理和检测方法可用于市售化妆品中8种性激素的分析测定，能够为化妆品卫生监督提供科学依据与技术支撑，对相关机构加强化妆品产品质量的监督管理和保障消费者身体健康具有重要意义。

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第一章 绪论

1.1 引言

1.2 性激素简介

1.3 化妆品中添加性激素的危害及相关法规

1.4 研究对象的选择

1.5 性激素的分析方法

1.6 工作意义及研究内容

第二章 实验材料及实验方法

2.1 实验试剂与仪器

2.2 实验样品的采集

2.3 标准溶液的配制

2.4 样品前处理方法实验

2.5色谱条件

2.6 标准工作曲线的绘制

2.7 方法的检出限实验

2.8 加标回收和精密度实验

2.9 实际样品测定

第三章 样品前处理方法研究

3.1 样品的涡旋振荡

3.2 超声提取条件的优化

3.3 净化条件的优化

3.4 本章小结

第四章 高效液相色谱分析方法的建立

4.1 色谱柱的选择

4.2 流动相及洗脱条件的选择

4.3 检测波长的选择

4.4 本章小结

第五章 方法评价及实际样品分析

5.1 线性关系与检出限

5.2 标准添加回收率和精密度

5.3 实际样品测定

第六章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

参考文献

论文发表情况

致谢