基于恒温隔绝式荧光PCR技术的猪流行性腹泻病毒检测方法的建立及应用

摘要

为建立猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）快速检测方法,参照Gen Bank中PEDV的N基因序列,设计引物及TaqMan探针,优化反应条件,建立了快速检测PEDV的荧光RT-PCR方法,并验证该法的敏感度、特异性和重复性。结果显示：该方法最佳反应体系为上游引物各1.5μL,下游引物各1.8μL,探针0.7μL,酶1μL,缓冲液12.5μL,模板2μL,补足DEPC水至25μL,获得的标准曲线方程为Ct=-3.15×lg拷贝数＋31.72,检测PEDV的敏感度可达0.32 TCID50/100μL,特异性好,对其他猪常见病毒检测结果均为阴性。结果表明：该方法适合猪流行性腹泻快速检测,为该病的诊断和防控奠定了基础。